Fundado en 1530 por las Comendadoras de la Orden de San Agustín. Hasta 1963 pervivió en la calle de su mismo nombre, junto al Paseo Zorrilla. Desde allí se trasladaron a un nuevo edificio de la calle Velázquez, junto con el patrimonio artístico acumulado.

Patrimonio artístico

- Retablo Mayor .-

Encargado por el patrono de la Capilla Mayor, D. Juan de Ortega, armero mayor de Felipe II, lo realizó Esteban Jordán, discípulo de Berruguete, en 1584. Como motivo central tiene un relieve de la Venida del Espíritu Santo, flanqueado por esculturas de San Juan Bautista y San Francisco. En el ático podemos observar una Ascensión, un Calvario y una escultura del patrono arrodillado.

- Figura funeraria de Juan de Ortega .-

Realizada en alabastro por Esteban Jordán.

- Figura funeraria de Dña. Francisca de Zúñiga .-

En actitud orante es de Pedro de la Cuadra, autor también de la sillería del coro.

- Reja .-

Fue realizada en 1582 por Alvaro de la Peña.

- Cristo yacente .-

Escultura de Fco de Rincón Sirvió como modelo para las de Gregorio Fernández.